无菌实验室常用的消毒灭菌方法是什么？

常用的实验室设备一般包括玻璃设备、金属设备、橡胶制品和塑料制品等。每种设备的处理和消毒措施都不同。严格的消毒灭菌工作很重要，直接影响整个实验能否顺利进行。那么无菌实验室常用的消毒灭菌方法是什么？

目前无菌实验室常用的消毒灭菌方法主要有物理方法(如干热灭菌、湿热灭菌、过滤灭菌、辐射灭菌等。)和化学方法(消毒剂、抗生素)。

　　1.湿热灭菌

　　湿热灭菌是指用饱和蒸汽、沸水或循环蒸汽进行灭菌，压力蒸汽湿热灭菌是目前常用的灭菌方法。它利用蒸汽环境中的高压蒸汽、潜热和良好的穿透力，使细菌蛋白凝固变性，杀灭微生物。适用于布料工作服、各种器皿、金属器具、橡胶塞、蒸馏水、棉签、纸张和一些培养液的灭菌。

　　有三种类型

　　(1)循环蒸汽灭菌：指在常压下，100加热循环蒸汽杀灭微生物的方法，灭菌时间通常为30-60分钟。这种方法适用于不耐热的制剂的消毒灭菌，但不能保证杀死全部孢子，是一种不可靠的灭菌方法。

　　(2)间歇蒸汽灭菌：通过反复循环蒸汽加热，杀死包括孢子在内的所有微生物。方法与循环蒸汽灭菌相同，但需重复3次以上。每隔一段时间，将待灭菌的物体放入37的培养箱中过夜，以使孢子发育成繁殖体。如果被灭菌物体不耐100高温，可将温度降至75 ~ 80，加热时间可延长至30 ~ 60分钟，次数可增加。适用于不耐热的含糖或牛奶的培养基。

　　(3)高压蒸汽灭菌：103.4 kPa的蒸汽压力达到121.3，保温15-20分钟。

　　2.干热灭菌法

　　是在恒温干燥箱中利用120C  ~ 150C的高热90 ~ 120分钟杀灭细菌和孢子的方法。主要适用于在压力蒸汽灭菌器中灭菌不方便、不易被高温损坏的玻璃器皿、金属器具和不能与蒸汽接触的物品的灭菌。用这种方法消毒的物品干燥，易于保存。酒精灯火焰燃烧杀菌也是干热杀菌方法之一。动物细胞体外培养时，往往需要使用台面上的酒精灯火焰来补充金属器皿和玻璃器皿的灭菌。

　　3.辐射灭菌法

无菌实验室采用紫外线灯辐照灭菌法。紫外线是一种低能量的电磁辐射，可以杀死多种微生物。紫外线的作用机制是使微生物的核酸和蛋白质失活。适用于实验室空气、地面和手术台的消毒。杀菌时间为30分钟。用紫外线消毒时，应注意不要边照射边进行实验操作，因为紫外线不仅对人体皮肤有害，而且对培养物和一些试剂也有不良影响。

4.化学消毒剂消毒方法

　　可用于物品、空气、工作面、操作者皮肤、一些实验用具等。其不能通过物理方法灭菌。常用的化学消毒剂有甲醛、70% ~ 75%乙醇、来苏水、0.1%新洁尔灭、碘伏或碘酊等。其中70% ~ 75%乙醇、10%次氯酸钠对实验材料进行灭菌。无菌实验室和培养室采用甲醛或乙二醇(6mL/m3)加热熏蒸消毒。使用中要注意安全，尤其是皮肤或实验材料上使用的消毒剂，只有选择合适的消毒剂种类、浓度和处理时间，才能达到安全和灭菌的目的。

　　5.过滤灭菌法

　　它是一种通过微孔滤膜过滤液体或气体，使大于滤膜孔径的细菌等微生物颗粒被堵塞的杀菌方法。无菌实验室过滤灭菌法主要用于试剂、酶溶液、血清、培养液等。它们在受热时容易分解和变性。目前正压过滤灭菌一般采用微孔膜金属过滤器或塑料过滤器，或者负压过滤灭菌采用玻璃细菌过滤器和过滤球。滤膜的孔径应在0.22 ~ 0.45微米的范围内，或应使用较小的细菌滤膜。溶液通过滤膜后，细菌和孢子因大于滤膜孔径而被阻挡，应利用滤膜的吸附作用阻挡小于滤膜孔径的细菌渗透。

　　6.抗生素抑菌法

　　主要用于培养基中，是培养过程中防止微生物污染的重要手段，也是微生物污染不严重时的“急救”措施。常用的抗生素有青霉素、链霉素、新霉素。