无菌实验室管理的要求是什么？

无菌实验室又称洁净室、洁净室或洁净室，无菌实验室的主要功能是控制室内污染。没有无菌实验室，就不可能批量生产污染敏感零件。无菌实验室定义为具有空气过滤、分配、优化、建筑材料和设备的房间，其中使用特定的常规操作程序控制空气悬浮颗粒的浓度，以达到适当的颗粒清洁度水平。下面详细列出了各区域的详细技术操作和试剂。

1.样品制备区

该区域专门用于样品制备。制备和操作核酸提取试剂时应采取预防措施：

1） PCR产物和带有待扩增序列的DNA克隆不能在这个房间内操作。

2） 将组织培养物、组织样品和血清样品带入样品制备室进行处理，根据应用需要提取DNA或RNA。

3） 用于样品处理的东西不能用作一般的分子克隆，也不能用作操纵目标序列。

4） DNA样本应使用特殊的保护性或正压活塞吸管进行操作，以防止气溶胶在罗氏样本中传播。

5） 大容量样品应使用无菌一次性移液管包装。

6） 在打开管道之前，应进行短暂的离心，以减少气溶胶的发生，且管道不得因用力而破裂，从而导致气溶胶。

7） 任何时候都要穿实验服和戴手套。应经常更换手套，尤其是在提取过程的每个步骤。实验服应在样品制备室专门使用，并经常清洗。

2.样品制备和rna pcr

rna pcr的额外步骤需要额外的样本操作，这增加了样本间污染的机会。为防止此问题，可在样品制备区域执行反转录步骤。

3.前PCR区

有一个专门用于准备各种反应的区域。该区域保持清洁，不受克隆和样品制备的污染。在预PCR区域配备试剂和制剂，特别是在预PCR区域专门使用的正压活塞移液管。

4.PCR实验室试剂的操作

1） 使用的所有溶液应无核酸和/或核酸酶（DNase和RNase）污染。

2） 所有PCR试剂中使用的水应为高质量的新鲜蒸馏去离子水，经0.22μM过滤和高压灭菌。

3） 对于在20℃至25℃下储存的试剂，建议添加一些抗菌剂，如叠氮化钠。在扩增试剂或样品制备试剂中加入0.025%叠氮化钠不会克制扩增反应。

4） 所有使用的试剂应大批量生产。进行实验，看看试剂是否符合要求，然后将其包装成只够一次使用的量，以便储存。

5） 所有试剂和样品的制备均应使用一次性灭菌瓶和试管。

6） 在使用新试剂制备新样本之前，应对其进行测试。

7） 样品制备和PCR前区域使用的移液管在不使用时应小心保存。